专业背景：计算机科学 研究方向与兴趣: JavaEE-Web软件开发, 生物信息学, 数据挖掘与机器学习, 智能信息系统 目前工作: 基因组, 转录组, NGS高通量数据分析, 生物数据挖掘, 植物系统发育和比较进化基因组学
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如何批量Blast
本文详细出处参考：http://liucheng.name/1221/
http://boyun.sh.cn/bio/?p=1483
构建的fasta格式的数据库文件必须被formatdb格式化后，才能被blastall、blastpgp、MegaBLAST使用。数据库文件也可以是ASN.1格式，但较少用到，所以下面还是主要以FASTA格式为例。
formatdb格式化数据库后，创建三个主要的文件——库索引(indices)，序列(sequences)和头(headers)文件。生成 的文件的扩展名分别是：.pin、.psq、.phr（对蛋白质序列）或.nin、.nsq、.nhr（对核酸序列）。另外，为便于查找还有一些ISAM 索引文件同时生成：.pni和.pnd（或.nni和.nnd）文件，其中的数字索引只包含gi号；而其他的序列识别符和索引则包含在.psi 和.psd（或.nsi和.nsd）中。
表：formatdb命令的参数说明
| 参数 | 说明 | 值 | 默认值 | 备注 |
| -t | 数据库的标题【可选】 | 字符 | ||
| -i | 需要创建数据库的文件名 | 文件名 | ||
| -l | 日志文件名 | 文件名 | formatdb.log | |
| -p | 文件数据类型 | [T/F] | T | T – 蛋白质F – 核苷酸 |
| -o | 解析选项 | [T/F] | F | T表示解析序列文件并产生索引文件，F则不解析 |
| -a | 数据库文件是否为ASN.1格式 | [T/F] | F | T为是ASN.1格式 |
| -b | ASN.1的模式 | [T/F] | F | T为二进制，F为文本模式 |
| -e | ASN.1数据库的序列数 | [T/F] | F | T表示数据库中只有一条序列 |
| -n | 重命名数据库文件的名称 | 字符窜 | ||
| -v | 数据库卷的大小 | 整数 | 0 | 单位：兆字符 |
| -s | 限制索引的类型 | [T/F] | F | T为仅用接收号创建索引 |
| -L | 创建数据库别名 | 输出文件名 | ||
| -F | Gi列表的文件名 | 输入文件 | 配合-L使用 | |
| -B | 生成的Gi二进制的文件名 | 输出文件 | 配合-F使用 |
formatdb -i protein_db_file_name -p T –o T
formatdb -i protein_db_file_name -p T –o T
如果经常搜索一个数据库的子集，比如一个核酸库中的家蚕的序列或者蛋白库中的G蛋白序列，可以用这些序列的gi号来限制搜索的范围，而没有必要重新构建这样的数据库，这样即加快了查询速度，又避免另外的磁盘开销。这里以昆虫核酸数据库的限定家蚕的序列为例子：
a） 获得家蚕序列的gi号，可以从文章或者数据库中检索得到。将gi号保存到一个文本文件中，这里命名为“silkworm.gi.txt”；
b） 利用formatdb程序将这个文本文件，转变为二进制文件；
formatdb -F silkworm.gi.txt -B silkworm.gi
c） 调用formatdb创建别名文件
formatdb -i insects -p T -L silkworm -F silkworm.gi -t "My silkworm database"
该命令会创建一个silkworm.pal文件，包含silkworm数据库的标题，限制的gi号文件，及其他一些统计信息，如下：
# # Alias file created Thu Jul 5 15:04:29 2001 # # TITLE My database # DBLIST ../blast/insects # GILIST silkworm.gi # #OIDLIST # NSEQ 1836 LENGTH 640724
d） 搜索家蚕数据库
blastall -p blastn -d silkworm -i MYQUERY -o MYOUTPUT
下列情况下，“-o”必须设置为TRUE：
从NCBI FTP服务器上下载的数据库，或者能保证数据库中的fasta序列都有唯一标识符的数据库，格式数据库时，建议将-o参数设置为TRUE。
一个单独的blast数据库最大只能为4G，如果格式的数据库大于4G，在“-v”参数未设置的情况下，farmatdb程序会自动对数据库分卷，每卷最大为4G。可以使用“-v”参数设置卷的大小，比如下面命令将卷的大小设置为2G：
formatdb -i hugefasta -p F -v 2000000000
卷的命名规则是，原数据库的名称加两个数字的卷号扩展名，使用数据库时，还是使用原来的数据库名称：
blastall -i infile -d hugefasta -p blastn -o out
其实，blast程序是根据文件名为数据库名加扩展名为“nal”（对于蛋白质数据库扩展名为“pal”）的文件来判断要搜索的数据库的，如上例中，是根据文件“hugefasta.nal”来确定分卷的数据库。“.nal”或“.pal”文件的格式为：
# # Alias file created Tue Jan 18 13:12:24 2000 # # TITLE hugefasta # DBLIST hugefasta.00 hugefasta.01 hugefasta.02 # #GILIST # #OIDLIST #
其中TITLE行定义数据库的标题，DBLIST定义要搜索的数据库名称，数据库名称用空格分开。用户如果要同时搜索多个数据库，可以按照上面文件 的格式，用文本编辑器创建类似的文件，文件名就是数据库的名称，如果是核苷酸数据库，就加“.nal”后缀，如果是蛋白质数据库就加“.pal”后缀。 DBLIST行放入数据库的名称，这样可以像使用其他数据库一样使用这个数据库。例如创建一个”multi.nal”文件，内容如下：
# # Alias file created Tue Jan 18 13:12:24 2000 # # TITLE multi # DBLIST part1 part2 part3 # #GILIST # #OIDLIST #
他包含part1，part2，part3三个数据库，如下命令，对该数据库进行blast
blastall -i infile -d multi -p blastn -o out
如果你的数据库和工作目录不在同一个目录，或者你在几个目录下处理数据，并且对于数据库的需求也同，比如一个家蚕数据处理，一个是果蝇的数据处理，这时你可以用“-n”参数在工作目录下创建一个数据库别名文件，这样可以避免指定数据库是带入冗长的目录：
formatdb -i insects -n ../blast/insects -p T -L wilkworm -F silkworm.gi -t "My database"
这时，会生成类似与下面内容的silkworm.pal文件：
# # Alias file created Thu Jul 5 15:04:29 2001 # # TITLE My database # DBLIST ../blast/insects # GILIST silkworm.gi # #OIDLIST # NSEQ 1836 LENGTH 640724
(通过上面的几个例子，大家一定对.pal文件有了深入的了解，就可以用文本编辑器，编写这个文件，灵活订制数据库，使搜索变得更方便)
如果是自己构建的数据库，数据库中fasta格式序列命名有以下三种方式：
identifier为你指定的序列名称，dababase为你要指定的数据库的名称（详细的说明参见fasta序列格式章节）。如果要使用“-o T”设置，序列的名称应该唯一，不能重复。
uncompress -c nt.Z|formatdb -i stdin -o T -p T -n "nt" -v 100000000
formatdb会默认生成一个名称为formatdb.log的日志文件，记录数据库生成的时间，及其程序运行的结果。运行程序后，读一下日志文件是很好的习惯，以确保数据库正确格式化。也可以通过“-l”参数指定日志文件。
命令举例：
formatdb-t “E. coli genome”-i U00096.fna -p F -o T -n ecoli
formatdb-t “Clusters of OrthologusGroups”-i COGsDB
formatdb-t “Non-Redundant Protein Database”-i nr -o T
formatdb :
在对核苷酸或蛋白质序列数据库进行Blast搜索之前，必须要对所使用的序列数据库进行formatdb， 即对序列数 据库进行格式化，这是所有使用BLAST所必须的一步。
格式化序列数据库— —formatdb
formatdb简单介绍
formatdb处理的都是格式为 ASN.1和 FASTA，而且不论是核苷酸序列数据库，还是蛋白质序列数据库；不论是使用Blastall ，还是Blastpgp，Mega Blast应用程序，这一步都是不可少的。
formatdb命令行参数
formatdb - 得到formatdb 所有的参数显示（见附录二）和介绍，
它可以根据我们的想法把源数据库格式化
主要参数的说明
-i 输入需要格式化的源数据库名称 Optional -p 文件类型，是核苷酸序列数据库，还是蛋白质序列数据库 T – protein F - nucleotide [T/F] Optional default = T -a 输入数据库的格式是ASN.1（否 则是FASTA） T - True, F - False. [T/F] Optional default = F -o 解析选项 T - True: 解析序列标识并且建立目录 F - False: 与上相反 [T/F] Optional default = F
命令示例
formatdb -i ecoli.nt -p F -o T
此时，blastall可以直接使用。
附详细说明:
Command Line Options
A list of the command line options and the current version for formatdb may be obtained by executing formatdb without options, as in:
formatdb -The formatdb options are summarized below:
formatdb 2.2.5 arguments:
-t Title for database file [String]
Optional
-i Input file(s) for formatting (this parameter must be set)
[File In]
-l Logfile name: [File Out]
Optional
default = formatdb.log
-p Type of file
T - protein
F - nucleotide [T/F] Optional
default = T
-o Parse options
T - True: Parse SeqId and create indexes.
F - False: Do not parse SeqId. Do not create indexes.
[T/F] Optional default = FIf the "-o" option is TRUE (and the source database is in FASTA format), then the database identifiers in the FASTA definition line must follow the convention of the FASTA Defline Format. Please see section "F Note on creating custom databases" below.
-a Input file is database in ASN.1 format (otherwise FASTA is expected)
T - True,
F - False.
[T/F] Optional default = F
-b ASN.1 database in binary mode
T - binary,
F - text mode.
[T/F] Optional default = FA source ASN.1 database may be represented in two formats - ascii text and binary. The "-b" option, if TRUE, specifies that input ASN.1 database is in binary format. The option is ignored in case of FASTA input database.
-e Input is a Seq-entry [T/F]
Optional
default = FA source ASN.1 database (either text ascii or binary) may contain a Bioseq-set or just one Bioseq. In the latter case the "-e" switch should be set to TRUE.
-n Base name for BLAST files [String]
OptionalThis options allows one to produce BLAST databases with a different name than that of the original FASTA file. For instance, one could have a file named 'ecoli.nuc.txt' and and format it as 'ecoli':
formatdb -i ecoli.nuc.txt -p F -o T -n ecoli
uncompress -c nr.z | formatdb -i stdin -o T -n nrThis can be used in situations where the original FASTA file is not required other than by formatdb. This can help in a situation where disk-space is tight.
-v Database volume size in millions of letters [Integer] Optional
default = 0
range from 0 to This option breaks up large FASTA files into 'volumes' (each with a maximum size of 2 billion letters). As part of the creation of a volume formatdb writes a new type of BLAST database file, called an alias file, with the extension 'nal' or 'pal'.
-s Create indexes limited only to accessions - sparse [T/F]
Optional
default = FThis option limits the indices for the string identifiers (used by formatdb) to accessions (i.e., no locus names). This is especially useful for sequences sets like the EST's where the accession and locus names are identical. Formatdb runs faster and produces smaller temporary files if this option is used. It is strongly recommended for EST's, STS's, GSS's, and HTGS's.
-L Create an alias file with this name
use the gifile arg (below) if set to calculate db size
use the BLAST db specified with -i (above) [File Out] OptionalThis option produces a BLAST database alias file using a specified database, but limiting the sequences searched to those in the GI list given by the -F argument. See the section "Note on creating an alias file for a GI list" for more information.
-F Gifile (file containing list of gi's) [File In] OptionalThis option can be used to specify the GI list for the alias file construction (-L option above) or to produce a binary GI list if the -B option (below) is set.
-B Binary Gifile produced from the Gifile specified above [File Out]
OptionalThis option specifies the name of a binary GI list file. This option should be used with the -F option. A text GI list may be specified with the -F option and the -B option will produce that GI list in binary format. The binary file is smaller and BLAST does not need to convert it, so it can be read faster.
Notes/Troubleshooting:
A.) Note on -o option:
It is always advantageous to use the '-o' option if the database identifiers are in the format specified at ftp://ftp.NCBI.nih.gov/blast/db/README. If the database identifiers are in this parseable format, formatdb produces additional indices allowing retrieval from the databases by identifier. The databases on the NCBI FTP site contain parseable identifiers. It is sufficient if the first word on the FASTA definition line is a unique identifier (e.g., ">3091 Alcoho de..."). It is necessary to use parseable identifiers for the following cases:
1.) ASN.1 is to be produced from blastall or blastpgp, then "-o" must be TRUE.
2.) query-anchored alignments are desired (i.e., the '-m' option with a non-zero value is used).
3.) The gi's are desired as part of the output (i.e., '-I' is used).
4.) fastacmd will be used to fetch sequences from the database by accession or gi.
See Appendix 1: The Files Produced by Formatdb for more information in the -o T option.
B.) Note on "SORTFiles failed" message:
Formatdb will use the 'standard' temporary directory to sort the string indices on disk. Under UNIX this directory is often /var/tmp and if there is not enough space there, then the error message: "ERROR: [000.000] SORTFiles failed" will be issued. This can be avoided by setting the TMPDIR environment variable to a partition with more free space. This message may also often be avoided by using the sparse option (-s) for formatdb described above.
C.) Note on formatting large (4 Gig and larger) FASTA files:
A single BLAST database can contain up to 4 billion letters. If one wishes to formatdb a FASTA file containing more letters than this, several databases, each of a maximum size of 4 billion bases, will be produced. This will be done automatically if the -v argument is not set. One may also specify a smaller size for the volume databases by using the -v option:
formatdb -i hugefasta -p F -v 2000000000This command line will format the "hugefasta" FASTA file as a number of database "volumes," each containing a maximum of two billion base pairs, as specified by the "-v" option. Two billion is the current limitation on the NCBI toolkit command-line parser. The volumes will have names consisting of the root database name, "hugefasta" followed by a two-digit volume extension, followed by the usual BLAST database extensions. These smaller databases can be searched as if they were a single entity using:
blastall -i infile -d hugefasta -p blastn -o outIn this case, BLAST recognizes that the database "hugefasta" has been partitioned into several volumes because it detects a file with the name of the root database followed by an extension of "nal" (for protein databases, the extension is "pal"). This file specifies a database list to be searched when the root database name is specified to BLAST. BLAST sequentially searches each database listed in this "nal" file and generates output that is indistinguishable from that of a single database search. A sample "nal" file, resulting from formatting the datafile "hugefasta" into three volumes, is given below. The "DBLIST" line can also be edited to specify additional databases to be searched.
#
# Alias file created Tue Jan 18 13:12:24 2000
#
#
TITLE hugefasta
#
DBLIST hugefasta.00 hugefasta.01 hugefasta.02
#
#GILIST
#
#OIDLIST
#The "nal" and "pal" files can also be used to simplify searches of multiple databases created separately. For instance, a file called "multi.nal" containing the following lines could be created from scratch using a text editor.
#
# Alias file created Tue Jan 18 13:12:24 2000
#
#
TITLE multi
#
DBLIST part1 part2 part3
#
#GILIST
#
#OIDLIST
#The "multi.nal" file would allow the three databases, "part1", "part2", and "part3", to be searched by specifying a single database name, "multi", on the blastall command line as follows:
blastall -i infile -d multi -p blastn -o outThe reason for using database volumes, as opposed to simply making the indices in the BLAST databases large enough to handle all conceivable databases with an eight-byte 'integer', is that this would have doubled the size of the indices for all searches no matter how small the database. Hence very large FASTA files are broken down into a couple of databases.
Formatdb must be able to open files larger than 2 Gig in order to work on very large files. This is not a problem on a 64-bit OS and on certain 32-bit OS that allows binaries to be made large-file aware. The 32-bit Solaris formatdb binary on the NCBI FTP site is now compiled large file aware.
D.) Note on running formatdb on a database without uncompressing it:
Under UNIX it is possible to uncompress a database on the fly and pipe it to formatdb. This can reduce the disk-space needed for running formatdb on a large database. In addition, some operating systems cannot write files larger than 2 Gig to disk. To circumvent this on Unix or Linux systems, use a "pipe" system such as:
uncompress -c nt.Z|formatdb -i stdin -o T -p T -n "nt" -v 100000000In this case, no file is written which is larger than 1 Gig and an arbitrarily large database is formatted as a set of 1 Gig volumes. Note the use of the '-n' option that specifies the name of the resulting BLAST database. Note also that 'stdin' specifies that input will be coming from 'standard input'. The nt FASTA file is not needed for running BLAST searches and nt.Z may be deleted after formatdb has been run.
E) Note on creating custom databases:
With Standalone BLAST it is possible to take any custom file of FASTA sequences and use these as a database source file for searching. All BLAST database source files must be in FASTA format. In order to use the formatdb option -o T, especially for use with NCBI tool kit retrieval tools the FASTA defline must follow a specific format.
F) Note on creating an alias file for a GI list:
Formatdb can now produce a BLAST database alias file that specifies a (real) BLAST database to search as well as a GI list to limit the search. This is useful if one often searches a subset of a database (e.g., based on organism or a curated list). The alias file makes the search appear as if one were searching a real database rather than the subset of one. The procedure to produce an alias file for searching (protein) nr limiting it to a list of zebrafish GI's would be:
1.) obtain the list of zebrafish GI's from Entrez or some other source and keep it in a file called "zebrafish.gi.in".
2.) invoke formatdb to convert the text GI list to the more efficient binary format:
formatdb -F zebrafish.gi.in -B zebrafish.gi 3.) invoke formatdb with the following options:
formatdb -i nr -p T -L zebrafish -F zebrafish.gi -t "My zebrafish database"This will produce the alias file zebrafish.pal listing the database title, the real database to be searched, the GI file, and some statistics:
#
# Alias file created Thu Jul 5 15:04:29 2001
#
#
TITLE My zebrafish database
#
DBLIST nr
#
GILIST zebrafish.gi
#
#OIDLIST
#
NSEQ 1836
LENGTH 640724One can search this by invoking (for example):
blastall -p blastp -d zebrafish -i MYQUERY -o MYOUTPUTNOTE: One may wish to prepare the alias file in one directory, but move it to a different production directory that does not contain the real database. In that case you may use the '-n' option to specify a path to the real database in the production environment. In the example below the -n option is used to specify that the nr database can really be found at a relative path of ../../newest_blast/blast
formatdb -i nr -n ../../newest_blast/blast/nr -p T -L zebrafish -F
zebrafish.gi -t "My zebrafish database"and the alias file will be:
#
# Alias file created Wed Nov 28 13:55:41 2001
#
#
TITLE My zebrafish database
#
DBLIST ../../newest_blast/blast/nr
#
GILIST zebrafish.gi
#
#OIDLIST
#
NSEQ 1836
LENGTH 640724
构建本地Blast
Blast一种是在线的(http://blast.NCBI.nlm.nih.gov/Blast.cgi)，一种是本地的(Local BLAST，单机版BLAST，Standalone BLAST)。
对于少量的序列，如果要在跟整个（或者某一物种）核酸或者蛋白库比对，一般采用在线BLAST，简单易用，直观，容易被人接受其；对于大量序列，或者是目前不方便公开的数据库，或者是自定义的数据库，一般采用本地BLAST，其效率高，能满足用户更多的要求，但操作相对有点繁琐；
在线blast的说明看这里：NCBI在线Blast的图文说明
blast软件下载看这里： 最新版本地blast下载
构建本地Blast首先要准备什么：
下载blast软件
构建本地的blast数据库
学习blast的常用参数与命令
如何构建本地的blast数据库：
假设有一序列数据（sequence.fa，多序列，fasta格式），欲自己做成Blast数据库，典型的命令如下：
核酸序列：
$ ./formatdb –i sequence.fa –p F –o T/F
蛋白序列：
$ ./formatdb –i sequence.fa –p T –o T/F
执行blast:
获得了单机版的Blast程序，解压开以后，如果有了相应的数据库（db），那么就可以开始执行Blast分析了。
单机版的Blast程序包，把基本的blast分析，包括blastn，blastp，blastx等都整合到了blastall一个程序里面。
以下是一个典型的blastn分析命令：
(待分析序列seq.fa，数据库nt_db)
$./blastall –p blastn –i seq.fa -d nt_db –w 7 –e 10 –o seq.blastn.out
（该命令的意思是，对seq.fa文件中的核酸序列对nt_db数据库执行blastn搜索，窗口大小是7，e值限制是10，输出的结果保存到文件seq.blastn.out 中）。
Blastall的常用参数：
-p 程序名应该是blastn，blastp，blastx，tblastn，tblastx中的一个
-d 数据库名称，默认nr
-i 查询序列文件，默认stdin
-e E值限制，默认10
-o 结果输出文件，默认stdout
-F 过滤选项，默认T
-a 选择进行运算的CPU个数
本地Blast的详细使用方法
blastall -p blastn -i myRNA.fasta -d humanRNA.fasta -o myresult.blastout -a 2 -F F -T T -e 1e-10
解释如下：
blastall: 这是本地化/命令行执行blast时的程序名字！(Tips:blastall直接回车就会给出你所有的参数帮助，但是英文的)
-p: p 是program的简写,program在计算机领域中是程序的意思。此参数是指定要使用何种子程序，所谓子程序，就是针对不同的需要，如核酸序列和核酸序列进行比对、蛋白质序列和蛋白质序列进行比对、假设翻译后核酸序列于蛋白质序列进行比对，选择相应的子程序: blastn 是用于核酸对核酸 blastp 是蛋白质对蛋白质序列 等等，一共5个自程序。
-i: i 是input的简写，意思是输入文件，就是你自己的要进行比对的序列文件(fasta格式）
-d: d是database的简写,意思是要比对的目标数据库,在例子中就是humanRNA.fasta (别忘了要formatdb)
-o: o是output的简写，意思是结果文件名字，这个根据你自己的习惯起名字，可以带路径，(上边两个参数-i -d 也都可以带路径)
*注意以上4个参数是必须的，缺一不可，下面的参数是为了得到更好的结果自己可调的参数，如果你不加也没有关系，blastall程序本身会给一个默认值！
-a: 是指计算时要用的CPU个数，我的机器有两个CPU，所以用-a 2，这样可以并行化进行计算，提高速度，当然你的计算机就一个CPU,可以不用这个参数，系统默认值为1,就是一个CPU
-F: 是filter的简写，blastall程序中有对简单的重复序列和低复杂度的一些repeats过滤调，默认是T (注意以后的有几种参数就两个选项，T/F T就是ture,真，你可以理解为打开该功能; F就是false，假，理解为关闭该功能)
-T: 是HTML的简写，是指blast结果文件是否用HTML格式，默认是F!如果你想用IE看，我建议用-T T
-e: 是Expectation value，期望值，默认是10，我用的10-10！
BLASTALL 用法
a.格式化序列数据库
格式化序列数据库— —formatdb
formatdb简单介绍:
formatdb处理的都是格式为 ASN.1和 FASTA，而且不论是核苷酸序列数据库，还是蛋白质序列数据库；不论是使用Blastall ，还是Blastpgp，Mega Blast应用程序，这一步都是不可少的。
formatdb命令行参数:
formatdb - 得到formatdb 所有的参数显示（见附录二）和介绍，
主要参数的说明:
-i 输入需要格式化的源数据库名称 Optional
-p 文件类型，是核苷酸序列数据库，还是蛋白质序列数据库
T – protein F - nucleotide [T/F] Optional default = T
-a 输入数据库的格式是ASN.1（否 则是FASTA）
T - True, F - False. [T/F] Optional default = F
-o 解析选项
T - True: 解析序列标识并且建立目录
F - False: 与上相反
[T/F] Optional default = F命令示例:
formatdb -i ecoli.nt -p F -o T运行此命令就会在当前目录下产生用于BLAST搜索的7个文件，一旦如上的formatdb命令执行完毕，就不 再需要ecoli.nt，可以移除。此时，blastall可以直接使用。
b.Blastall常用参数简析
-p Program Name [String]
所用程序名称[String]，用 户可以根据需要从blastn，blastp，blastx，tblastn，tblastx中任选一程序。
-d Database [String] default = nr
所用序列数据库的名称 [String]，默认为：nr
-i Query File [File In] default = stdin
所用查询序列文件[File In]， 默认为：stdin，本文例为 test.txt
-e Expectation value (E) [Real] default = 10.0
期望值[Real] 默认为10.0 描述搜索某一特定数据 库时，随机出现的匹配序列数目。
-m alignment view options: 比对显 示选项，其具体的说明可以用以下的比对实例说明
0 = pairwise,显示具体匹配信息（缺省）
1 = query-anchored showing identities,查询-比上区域，显示一致性
2 = query-anchored no identities,查询-比上区域，不显示一致性
3 = flat query-anchored, show identities,查询-比上区域的屏文形式，显示一致性
4 = flat query-anchored, no identities,查询-比上区域的屏文形式，不显示一致性
5 = query-anchored no identities and blunt ends,查询-比上区域，不显示一致性，无突然的结束
6 = flat query-anchored, no identities and blunt ends,查询-比上区域的屏文形式，不显示一致性
7 = XML Blast output,XML格式的输出
8 = tabular,TAB格式的输出
9 =tabular with comment lines,带注释行的TAB格式的输出
10 =ASN, text,文本方式的ASN格式输出
11 =ASN, binary [Integer] default = 0,二进制方式的ASN格式输出
-m 8 用法举例说明如下：
A_query B_Sbjct 97.61 585 3 3 309 886 94498 95078 0.0 1017
A_query B_Sbjct 100.00 303 0 0 913 1215 95092 95394 2e-172 601
A_query B_Sbjct 100.00 209 0 0 1 209 94196 94404 3e-116 414
A_query B_Sbjct 100.00 123 0 0 1234 1356 95413 95535 6e-65 244
A_query B_Sbjct 100.00 41 0 0 210 250 94096 94136 5e-16 81.8
A_query B_Sbjct 100.00 35 0 0 251 285 94440 94474 2e-12 69.9
A_query B_Sbjct 100.00 29 0 0 885 913 95747 95775 7e-09 58.0
A_query A_query 97.61 585 3 3 309 886 403 983 0.0 1017
A_query A_query 100.00 303 0 0 913 1215 997 1299 2e-172 601
A_query A_query 100.00 209 0 0 1 209 101 309 3e-116 414
A_query A_query 100.00 123 0 0 1234 1356 1318 1440 6e-65 244
A_query A_query 100.00 41 0 0 210 250 1 41 5e-16 81.8
A_query A_query 100.00 35 0 0 251 285 345 379 2e-12 69.9
A_query A_query 100.00 29 0 0 885 913 1652 1680 7e-09 58.0
结果12列
Query id,Subject id,% identity,alignment length,mismatches,gap openings,q. start,q. end,s. start,s. end,e-value,bit score
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------
-o BLAST report Output File [File Out] Optional default = stdout,BLAST报告的输出文件[File Out] 默认为：stdout
-F Filter query sequence (DUST with blastn, SEG with others) [String] default = T
查询序列过滤，将那些 给出影响比对结果的低复杂度区域过滤掉。用blastn进行查询的序列用DUST程序过滤，其他的用SEG过滤 。对DUST和SEG的详细情况，用户可以自己查询资料。
-G Cost to open a gap (zero invokes default beha
空位开放罚分[Integer] (设为0则调用默认行为) 默认为0分
-E Cost to extend a gap (zero invokes default beha
空位扩展罚分[Integer] (设为0则调用默认行为) 默认为0分
-T Produce HTML output [T/F] default = F
以网页形式打印
-X X dropoff value for gapped alignment (in bits) (zero invokes default beha
blastn 30, megablast 20, tblastx 0, all others 15 [Integer]，default = 0
-I Show GI's in deflines [T/F] default = F
提示行显示GI number 默认不显示
-q Penalty for a nucleotide mismatch (blastn on
核酸序列基对不匹配所罚分数(blastn on
-r Reward for a nucleotide match (blastn on
核苷酸序列基对匹配所加分数(blastn on
-g Perfom gapped alignment (not available with tblastx) [T/F] default = T
是否执行带缺口的比对(not available with tblastx) 默认为是
-a Number of processors to use [Integer] default = 1
使用处理器的数目[Integer] 默认为单机
-B Number of concatenated queries, for blastn and tblastn [Integer] Optional default = 0
需要联配查询的序列数目 for blastn and tblastn [Integer] 默认为单序列
-M Matrix [String],default = BLOSUM62 打分矩阵，默认BLOSUM62
-W Word size, default if zero (blastn 11, megablast 28, all others 3) [Integer] default = 0
所开窗口
-w Frame shift penalty (OOF algorithm for blastx) [Integer] default = 0
窗口罚分
批量Blast
批量做Blast的问题还是蛮多网友问起的。既然这样，在这里就稍微讲讲吧。其它的Blast基础知识就略过了，不懂的就去Google本地Blast用法。
这篇文章默认为你已有了Blast的基础。
批量Blast
就是指多个序列的Blast。其实我也不明白为什么会有这么多人提这个问题，批量Blast就跟单个Blast一样的。
我们都知道，默认参数下的blastn是这样的：
blastall -p blastn -d BlastDB -i in_file.fasta >blast_output当in_file.fasta里面只有一个序列时，就是单个Blast啊。in_file.fasta也可以放多个Fasta格式的序列，这样子就是批量Blast了。
当然了，麻烦的是批量Blast之后的结果，一个的话我们可以看得了，当批量上千个时，我们不可能一个个看到的。这种小事情Blast早就想到了。这就引进了-m8参数。-b5参数是指显示匹配的前5个结果（默认好像是500个，忘记了）。
blastall -p blastn -d BlastDB -i in_file.fasta -m8 -b5 >blast_output-m8参数的输出结果有12列，每一列的解释如下(用Tab键隔开的)：
例子
Query_id,Subject_id,%identity,alignment_length,mismatches,gap_openings,q.start,q.end,s.start,s.end,e-value,bit_score
A_query B_Sbjct 97.61 585 3 3 309 886 94498 95078 0.0 1017
A_query B_Sbjct 100.00 303 0 0 913 1215 95092 95394 2e-172 601
A_query B_Sbjct 100.00 209 0 0 1 209 94196 94404 3e-116 414
A_query B_Sbjct 100.00 123 0 0 1234 1356 95413 95535 6e-65 244这样子的结果就方便后面的分析工作了。
推荐的命令行如下：
blastall -p blastn -d BlastDB -i in_file.fasta -m8 -b5 -b1 -a2 -FF >blast_output-a2参数是用二个CPU，加速。-FF是不过滤简单的重复序列和低复杂度的序列（默认是过滤的）。
其它更详细的参数，直接敲打blastall命令就能看到了。
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